En este trabajo de la Universidad de Seúl se cultivaron células epiteliales procedentes del limbo esclero-corneal de un donante humano y se expusieron a diferentes concentraciones de etanol (20-100%) durante 30 segundos. Se exploró la citotoxicidad del etanol mediante la cuantificación de la cantidad de lactato deshidrogensa (LDH) liberada por las células dañadas, así como la viabilidad y capacidad de proliferación celular mediante el ensayo MTT, cuantificando dicha proliferación mediante la medición de la incorporación de bromodeoxiuridina (BrdU) con un test colorimétrico. La influencia del etanol sobre la inducción de apoptosis se determinó mediante citometría de flujo con la tinción Annexin V-FITC y PI-PE así como mediante la tinción MitoCapture (donde las células apoptóticas no pueden acumular el sustrato en sus mitocondrias, permaneciendo como monómeros fluorescentes verdes en el citoplasma). Se expusieron las células incubadas a anticuerpos frente a los marcadores p63 y citoqueratina 3 y finalmente se evaluó la expresión de citoquinas proinflamatorias y marcadores específicos de células epiteliales corneales mediante RT-PCR.

Se observó un marcado incremento en la producción de LDH tras la exposición al etanol, sostenido durante al menos 48 horas, lo que confirmaría su ya supuesto efecto tóxico inmediato. Del mismo modo, se pudo constatar una reducción del número de células viables de forma dosis-dependiente y atribuible tanto a una disminución de la proliferación celular como a un aumento de la apoptosis, mantenida durante al menos 72 horas tras la exposición. Tanto la inmunohistoquímica como la RT-PCR confirmaron una reducción en la expresión de marcadores específicos corneo-limbares durante 24-48 horas y finalmente se pudo constatar un aumento de la expresión de citoquinas proinflamatorias (IL-1β, IL-6, IL-8, MMP-9, CCL2) tanto en las células epiteliales como estromales expuestas.

El etanol no sólo ejerce efectos citotóxicos directos sobre el epitelio corneal sino que además interfiere sobre la viabilidad celular mediante la promoción de la apoptosis y la inhibición de los mecanismos proliferativos. Estos efectos sobre el ciclo celular así como su capacidad para aumentar la expresión de citoquinas y quimiocinas proinflamatorias parecen prolongarse hasta 72 horas después de la exposición.

Dichos efectos podrían causar una depleción de células progenitoras límbicas especialmente en sujetos predispuestos, si bien los hallazgos obtenidos in vitro pueden diferir de aquellos producidos in vivo, donde el sistema fagocítico mononuclear podría limitar la propagación de señales proinflamatorias, promoviendo la resolución del proceso.

Una corta exposición del epitelio corneal al etanol, como se realiza de forma habitual en la práctica clínica, puede predisponer al desarrollo de trastornos de la superficie ocular, dada su capacidad para vulnerar la integridad epitelial y generar inflamación. Estos hallazgos nos obligan a ser cautelosos durante su empleo en la cirugía de la superficie ocular.

AUTOR:
Raquel Salazar Méndez
Servicio Oftalmología, Hospital Jarrio, Asturias